下一代蛋白酶抑制剂筛选系统

DIFF专利荧光报告系统与现有的病毒筛选方法相比，能够在细胞水平上直接对药物的活性进行正向筛选，很好地兼顾大规模筛选过程中的便利性与准确性。与传统FRET方法相比，无需底物添加，降低筛选成本。

迪福润丝专利蛋白酶抑制剂检测系统是基于绿色荧光蛋白（GFP）衍生蛋白的荧光报告技术。此系统的核心特点在于，只有在抑制剂有效作用于目标蛋白时，衍生蛋白才会发出荧光信号。随着抑制剂作用的增强，荧光强度亦会相应增加，这为定量分析提供了可靠的基础。本荧光报告系统适用于生物安全一级（BSL1）实验室，确保了操作的安全性和便利性。此外，该系统兼容高通量筛选平台，可与现有药物库联合使用，极大地提高了新型抗病毒药物筛选的效率和准确性。

本系统基于特制质粒的共表达机制，以新冠病毒为例，结合重组绿色荧光蛋白（rGFP）和冠状病毒3CL蛋白酶。在该系统中，rGFP序列中嵌入了3CL蛋白酶的特异性切割位点。当3CL蛋白酶功能正常时，会特异性裂解rGFP，导致其荧光功能丧失，荧光强度减弱。相反，当抑制剂有效抑制了3CL蛋白酶的活性时，rGFP无法被切割，维持其完整性并正常发出荧光，荧光强度增强。

药物有效性与荧光强度成正相关，是一种更直观的正向筛选方式。

系统原理

检测结果准确

使用活病毒进行检测，GC376的IC50值为4.69μM；而采用DIFF筛选系统，IC50值为6.44μM，两种方法测得的IC50值高度相近：

检测结果直观，可肉眼观测：

添加不同浓度新冠3CL蛋白酶抑制剂后，24h,48h,72h细胞GFP表达情况如下图所示：

本质粒系统在进行药物筛选时无需病毒参与，让实验不再受困于分离待测毒株。无需寻求高生物安全等级实验室（P2/P3/P4）。即可进行细胞水平的药物筛选。

系统检测的信噪比好，结果可靠，适用于高通量筛选：一个普通实验室一周即可筛选数万级候选化合物，极大地缩短前期研发周期。

适用于多种病毒的蛋白酶靶点新药发现